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关闭窗口 1.直接滴定法
2 原理
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，根据样品液消耗体积，计算还原糖量。
3 试剂
3.1 碱性酒石酸铜甲液
称取15g硫酸铜（CuSO4•5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
3.2 碱性酒石酸铜乙液
称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
3.3 乙酸锌溶液
称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
3.4 亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）
称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
3.5 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）
精密称取1.000g经过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。
3.6 盐酸
4 仪器
4.1 实验室常规仪器和设备
4.2 古氏坩埚或G4垂融坩埚
5 操作步骤
5.1 样品处理
将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。
称取约2.5～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL及亚铁氰化钾溶液（10.6+89.4）5mL，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
5.2 标定碱性酒石酸铜溶液
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
5.3 样品溶液预测
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
5.4 样品溶液测定 1
吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
6 结果计算
按下式计算糖果中还原糖的含量： 100100025021×××=VmmX
式中：X—样品中还原糖的含量（以葡萄糖计），%；
m1—10mL碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各5mL）相当于还原糖（以葡萄糖计）的质量，mg；
m2—样品质量，g；
V—测定时平均消耗样品溶液体积，mL。
7 精密度
同一样品两次平行测定值相对差不得超过15%。