1 主题内容与适用范围
    本标准规定了出口食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。
    本标准适用于出口食品的检验。
2 设备和材料
2.1 供常规平板计数用的基本设备与材料。
2.2  1)形玻璃棒。
3 培养基和试剂
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普通肉汤培养基。
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胰蛋白脉大豆肉汤。
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Baird-Parker培养基
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甲苯胺蓝-DNA琼脂。
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生理盐水。
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凝固酶试验兔血浆。
样品制 备
4.1 固体或半固体食品:以无菌操作称取25 g样品，放入装有225 mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内，
于8 000 r/min均质 1-2 min，制成 1 e 10样品匀液。
4.2 液体食品:用灭菌吸管吸取 25 mL样品，放入装有 225 mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内(瓶内预
段适当数量的玻璃珠).经充分振摇制成 1:10徉品匀液。
4.3 供汁数检验时，可按 }进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。
检验步骤
5. 1 最近似值(MPN)测定法
    适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少星金黄色葡萄球菌。
5.1门 选三个连续稀释度，从每 个稀释度分别取 1 mL稀释样品液，接种3管含 loy,X化钠胰蛋白陈
大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点，置36士1 C培养48 h
5.1,2 用3 mm接种环，从有细菌生长的各管中移取 1环 划线接种于表面干燥的Baird-Parker琼脂
平板，置36士1 C培养 45^-48 h,
5.1.3 从有细菌生长的每一平板上至少挑取 1个可疑金黄色葡萄球菌菌落〔见附录 B(参考件)〕，移种
中华人民共和国国家进出口商品检验局，992-12-28批准 1993-05-01实施
 I

SN 0172一 92
到肉汤培养基中，置 36士1℃培养20^24 h,
5.1.4 取肉汤培养物 。. 3 mL同0. 5 mL凝固酶试验免血浆于8 mm X 100 mm试管内充分混合，置36
士1℃培养，定时观察是否有凝块形成，至少观察 6h，以内容物完全凝固，使试管倒置或倾斜时不流动
者为阳性。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。对可疑结果，应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试
验{如耐热核酸酶试验〔见附录C(补充件)〕等}加以证实。
5.1.5 报告结果
    根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表〔见附录 D(补充件)〕，报告金黄色葡萄球菌的 MPN/g
(mL) o
5.2 平板表面计数法
    适用于检查金黄色葡萄球菌数不小于10/g(mL)的食品。
5.2.1 选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取 1 mL稀释样液，接种至 3个表面干燥的Baird-Parker
琼脂平板上(如 0.4 ml.-0. 3 ml,-0. 3 mL)e
5.2.2 以L形玻璃棒将接种物涂布于琼脂表面，避免涂到平板边缘，将平板正置直至接种物被培养基
吸收，将平板翻转,3611℃培养45^48 h,
5.2.3 挑选有 20 200个菌落的平板进行计数。如果有数种菌落皆类似金黄色葡萄球菌，则分别计算
和记录每一类型的菌落数。当最低稀释度的平板的菌落数小于20时，仍可选用。如平板上的菌落数大
于 200，其中有些菌落具有典型金黄色葡萄球菌的外观，同时在其高倍稀释度未出现典型菌落者，亦可
用这些平板进行金黄色葡萄球菌计数，但不能把非典型菌落计算在内。
5.2.4 从可计数的各类型菌落中至少各选取1个菌落，参照 5.1. 3-5.1.4条进行凝固酶试验。
报告结 果
    将呈凝固酶阳性的菌落所代表的 3个平板上的菌落数相加，并乘以样品稀释倍数，即以此数报告为
所检查食品中的金黄色葡萄球菌数/g(mL) e
5.3 非选择性增菌法
    适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品‘
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取 1:” 稀释的样品液 10 mL，接种于10 mL双料胰蛋白陈大豆肉汤中，36士1 C培养2 h,
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再加入 20 mL含 20%氯化钠的单料胰蛋白陈大豆肉汤,36士1℃培养 24士2卜。
乐 ， 。
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取上述培养物。2 mL，分别涂布于2个表面干燥的 Baird-Parker琼脂平板上,36士1 C培养46
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从每个平板上至少挑取 1个可疑金黄色葡萄球菌菌落.参照 5. 1. 3-5. 1. 4条进行凝固酶试验
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报告结果
如发现有凝固酶试验阳性的菌落，即报告 1 g(mL)食品中有金黄色葡萄球菌存在，否则为阴性。