1 主题内容与适用范围
本标准规定了食物中胡萝卜素的测定方法－纸层祈法。
本标准适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡萝卜素的测定， 其最小检出限为0．ll μg。
2 原理
以丙酮和石油醚提取食物中的胡萝卜素及其他植物色素；以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离；剪下含胡萝卜素的区带， 洗脱后于450 nm波长下定量测定。
3试剂
3．1 石油醚（沸程30～60℃）：同时是展开剂。
3．2 丙酮：分析纯。
3．3 丙酮·石油醚混合液：3：7（V/V）。
3．4 无水硫酸钠：分析纯。
3．5 5％硫酸钠溶液。
3．6 1:1氢氧化钾溶液：取50g氢氧化钾溶于50 mL水。
3，7 无水乙醇：需经脱醛处理。
3．8 β－胡萝卜素标准溶液：取5mg β－胡萝卜素标准品，溶于10 mL三氯甲烷中， 浓度约为500μg/mL，准确测其浓度。
取标准溶液10.0μL加正己烷3.00mL，混匀，测吸光值，比色杯厚度lcm，以正己烷为空白，入射光波长450 nm，平行测定三份，取均值。
计算公式：
A 1 3．0l
X1＝-----×----------×---------- …………………（1）
E 1000 0.01
式中 X-------胡萝卜素标准溶液浓度，mg/mL
A--------吸光值：
E--------β胡萝卜素在正己烷溶液中，入射光波长450 nm。
比色杯厚度为1cn，溶液浓度为1ppm的吸光系数，为0.263 8；
1
---------- 一一 将ppm换算成mg/mL
1000
3.01
---------- 一一测定过程中稀释倍数的换算。
0.01
3．9 β-萝卜素标准使用液：将已标定的标准液用石油醚准确稀释后，每毫升溶液相当 50μg，避光保存于冰箱中。
4仪器和设备
4．1实验室常用设备。
4．2玻璃层析缸。
4．3计光光度计。
4．4旋转蒸发器：具150 mL球形瓶。
4．5恒温水浴锅。
4．6皂化回馏装置。
4．7点样器或微量注射器。
4．8新华滤纸：定性，快速或中速， 101号。
5样品的采集和处理。
5.l粮食：样品用水洗三次，置60℃烤箱中烤干，磨粉，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧瓶塞保存，备用。
5.2蔬菜与其他植物性食物：取可贪部用水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎，用匀浆器制成匀浆，贮于塑料瓶内，冰箱内保存备用。
6测定步骤（以下步骤需在避光条件下进行）
6．1样品提取
6．1.1取适量样品，相当于原样1－5g（含胡萝卜素约20一80μg的匀浆，粮食样品视其胡萝卜、素含量而定，置100 mL带塞锥形瓶中，加入丙酮20mL，石油醚5mL，振摇1min，静置5min，将提取液转入盛有100 mL5%硫酸钠溶液的分液漏斗中，再于锥形瓶中加中加人10mL丙酮－石油醚混合液，振摇1min，静置加5min．将提取液并入分液漏斗中。如此提取2一3次，直至提取液无色为止。
6.1.2植物油和高脂肪样品：需先皂化，取适量样品(＜10g)．加脱醛乙醇30mL，再加10mL 1：1氢氧化钾溶液，回流加热30 min，然后用冰水使之迅速冷却，皂化后样品用石油 醚提取，直至提取液无色为止。
6．2洗涤
6．2．1将提取液（6．1．1）静置分层，弃去下层水溶液，反复用5%硫酸钠溶液振摇洗涤， 每次约15mL，直至下层水溶液清亮为止。
6．2，2将皂化后样品提取液（6．1．2)用水洗涤至中性。
6．2．3将6．2．1或6．2.2的石油醚提取液通过盛有10 g无水硫酸钠的小漏斗，漏入球形瓶，用少量石油醚分数次洗净分液漏斗和无水硫酸钠层内的色素，洗涤液并入球形瓶内。
6．3浓缩与定容
将上述球形瓶内的提取液于旋转蒸发器上减压蒸发，水浴温度为60℃，蒸发至约1mL 时，取下球形瓶，用氮气吹干，立即加入2．00mL石油醚定容，备层析用。
6.4纸层析
6.4．1点样：在18cmX30cm滤纸下端距底边4cm处作一基线，在基线上取A、B、C、D四点（见附图1中图1所示），吸取0．100～0．400 mL浓缩液（6．3）在AB和CD间迅速点样。
6.4．2展开：待纸上所点样液自然挥发干后，将滤纸卷成圆筒状，置于预先用石油醚饱和的层析缸中，进行上行展开。
6．4，3 洗脱：待胡萝卜素与其他色素完全分开后，取出滤纸，自然挥发干石油醚，将位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，立即放人盛有5mL石油醚的具塞试管中，用力振摇，使胡萝卜素完全溶入溶剂中。
6．5 比色测定
用1cm时比色杯，以石油醚调节零点，于450nm波长下，测吸光度，以其值从标准曲线上查出β－胡萝卜素的含量，供计算时使用。
6.6标准曲线绘制
取β胡萝卜素标准使用液（浓度为50μg/mL）1.00、2．00、3．00、4．00、6．00、8．00mL，分别置于100 mL具塞锥形瓶中，按样品测定步骤进行操作，点样体积为0．100 mL，标准曲线各点胡萝卜素含量依次为2．50，5．00、7．50、10．00、15．00、20．00μg为测定低含量样品．可在0至2．50μg间加做几点， 以胡萝卜素含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线（见附图1中图2）。
7计算
V2 100 1
X2＝C×--------×---------×------------ ……………（2）
V1 m 1000
式中：x2一样品中胡萝卜素的含量，以β萝卜素计，mg/l00g;
C一在标准曲线上所查得的胡萝卜素的含量，μg;
V1一点样体积，mL；
V2一样品石油醚摸取液浓缩后的定容体积，mL，
m一样品质量，g
8 结果的允许差
同一实验室平行测定或重复测定结果的相对偏差绝对值≤10％。
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